Preguntas y respuestas taller online -método de vitrificación

  • Andrea Medina Valencia: ¿ cómo se prepara la solución de DS y WS para colapsar el blastocisto ?

La solución del DS (Diluent Solution) y WS (Whasing Solution) son dos soluciones que pertenecen al kit de cryotech (WARMING), ambas soluciones están diseñadas inicialmente para desvitrificar. Y que nosotros estamos utilizando ahora también para deshidratar previamente al blastocisto. Es decir que colocaremos al blastocisto en una solución hipertónica. Recordemos que realizaremos este paso, solo cuando el blastocisto tenga un diámetro mayor a 220µm.

Preparación: Se toman 20µl de la solución DS y se coloca la microgota en una placa, posteriormente tome 30µl de solución WS y coloque esta microgota por encima de la anterior, logrando una gota de 50µl, solución hipertónica que permitirá la adecuada deshidratación del blastocisto con diámetros mayores de 200µm. (DS:WS=2:3)

  • Paola Manzur Aldana: ¿Ese paso de colapso de los blastocistos previo a la vitrificación se hace a temperatura ambiente?

Es correcto las temperaturas de nuestro laboratorio (ambiente) durante la vitrificación, desvitrificación y deshidratación previa de los blastocistos deberán ser entre los (25°C-27°C). También la temperatura de la cabina (campana de flujo laminar) deberá estar dentro de los mismos rangos. Y las temperaturas de los medios también deberán de permanecer en estos rangos. Asegúrese de tener los kits fuera del refrigerador y con un tiempo optimo antes de su uso.

  • María Fernanda Rentería: ¿Los device los dejas enfriando dentro del nitrógeno?

Las pajuelas (straws) deben estar reposados en la placa de vitrificación la cual tiene una hendidura para que usted pueda dejar ahí la pajuela ya rotulada y lista para sus pacientes, hasta en este momento la pajuela está a una temperatura ambiente. Mientras que la tapa de la pajuela puede estar sumergida desde el inicio en la hielera con el nitrógeno líquido. Asegúrese de que su hielera este alejada durante el inicio de los medios de vitrificación para que las temperaturas de los medios no desciendan o bien si lo prefiere una vez sumergido el Straw (pajuela), y posterior a la vitrificación, puede sumergir la tapa y hasta que este deje de sacar burbujas, la temperatura será la adecuada para ser sellada en el Straw, cerciórese de realizar un sellado correcto tanto con la pinza y posteriormente con la mano, como se demuestra en el video.

  • María Fernanda Rentería: ¿Mencionaste máximo 15 min y máx. 12 min, puedes modificar los tiempos de acuerdo a como los veas) Y cuál es el mínimo en caso de ser así?

Es correcto el protocolo marca un tiempo limite en los óvulos y blastocistos que es de 15 minutos; mientras que en los embriones y zigotos es de 12 minutos. El tiempo lo determina la calidad de tus células, es decir que las células determinan cuando están listas, según su recuperación en el medio de ES (Equilibration Solution). El mínimo de tiempo en que yo en mi experiencia he realizado ha sido en los óvulos con un tiempo de 10-12 minutos, siendo óvulos de donantes.

  • María Fernanda Rentería: ¿Me refería a las tapas de las pajuelas, las enfrías antes ?

La tapa de la pajuela puede estar sumergida desde el inicio de la vitrificación o al final.

Cuando es inicial puede colocar la tapa en la hielera con el nitrógeno líquido. Asegúrese de que su hielera este alejada durante el inicio de los medios de vitrificación para que las temperaturas de los medios no desciendan. Si lo realiza al final solo sumerja la tapa posterior a su vitrificación. La tapa debe de estar completamente fría, sin flotar y sin que esta esté burbujeando, después de ello puede completar el proceso y tapar su pajuela, cerciórese de realizar un sellado correcto tanto con la pinza y posteriormente con la mano, como se demuestra en el video

  • Miroslava Quintero: ¿Buenas noches acabas de mencionar que la gota de 50ul se coloca el ovulo o el blastocisto?

 La microgota para deshidratar a el blastocisto pre a la vitrificación del protocolo CRYOTEC es de 50µl y solo es exclusivo para los blastocistos y solo aquellos que tienen un diámetro mayor de 220µm. Para los óvulos el protocolo es directo al ES (equilibration solution)

  • Andrea Medina Valencia: ¿ósea se mezclan amabas soluciones?

Si las soluciones se mezclan. El protocolo cryotec está diseñado para blastocistos con <220µm o igual, de lo contrario si fuese mayor a las 220µm tendremos que colocarlo en una solución previa (hipertónica) para deshidratarlo. Por lo tanto, la solución DS y la solución WS, se mezclan para conformar una microgota de 50µl.

Preparación: Se toman 20µl de la solución DS (Diluent Solution) y se coloca la microgota en una placa, posteriormente tome 30µl de solución WS (Whasing Solution) y coloque esta microgota por encima de la anterior, logrando una gota de 50µl, solución hipertónica que permitirá la adecuada deshidratación del blastocisto con diámetros mayores de 200µm. (DS:WS=2:3)

  • Andrea Medina Valencia: ¿no entendí bien. se mezcla el DS y el WS 20 y 30 uL?

 Es correcto se mezclan ambas. Se toman 20µl de la solución DS  (Diluent Solution) y se coloca la microgota en una placa, posteriormente tome 30µl de solución WS (Whasing Solution) y coloque esta microgota por encima de la anterior, logrando una gota de 50µl, solución hipertónica que permitirá la adecuada deshidratación del blastocisto con diámetros mayores de 200µm. (DS:WS=2:3)

He realizado un esquema y espero que ayude un poco para ejemplificar lo ya descrito.

  • Andrea Medina Valencia: ¿no entendí bien. se mezcla el DS y el WS 20 y 30 uL ?

Es correcto lo que buscamos es tener una solución hipertónica y deshidratar la célula en el caso de blastocistos con mayor diámetro es decir mayo de 220µm. la solución final deberá ser una microgota de 50 µl con la combinación de DS:WS=2:3.

Sin embargo, es importante aclarar que, si usted realiza una biopsia en día cinco o seis, posterior a la biopsia se colapsara el blastocisto y una vez que este ha encogido no es necesario que usted lo ponga en la solución de DS:WS, pues ya hemos logrado el objetivo que es deshidratarlo para después vitrificarlo, de tal manera que después de biopsiar usted lo podrá colocar directamente en ES.

  • Graciela Morales: ¡Hola!, no capté las cantidades medio que se utiliza para los blastocistos expandidos, ¿serían 20 uL DS + 30 uL WS?

 Si es correcto, ambas soluciones se mezclan con esta cantidad buscando una microgota con una solución que nos permita deshidratar la célula, una vez que usted lo ha hecho podrá colocar el blastocisto y pipetearlo alrededor de unas cinco veces dentro de la solución en un lapso de un minuto para que este encoja e iniciar el protocolo CRYOTEC.

  • Yorelys Cerrud : ¿Aunque este Hatching el blasto lo deshidrato?

 El blastocisto deberá ser deshidratado dependiendo del diámetro, en el caso del protocolo de Cryotec, con un diámetro mayor a 220µm usted deberá deshidratarlo, pues con un diámetro mayor, la cantidad de líquido aumenta la probabilidad de hielo intracelular.

  • Isolina Marval: ¿La pajuela se puede apoyar en la nevera sin tapa? No pasa nada

Es correcto, una vez sumergida la pajuela dentro del nitrógeno liquido y desapareciendo las burbujas usted puede soltar la pajuela y dejarla sumergida o bien reposada en alguna esquina de la hielera sin problema alguno. Esto mientras usted sumerge la tapa y espera para poder cerrar su device o bien mientras continúa vitrificando.

  • Juliana Martins: ¿En la solución de TS debe dejar 1 minuto los bastos antes de pasar a la DS o debe estar hasta un minuto y pasarlos desde que se sueltan?

 Las células que se desvitrifiquen (embriones, óvulos, blastocistos, zigotos) es decir en cualquier etapa deberán estar sumergidas las pajuelas por un minuto (1:00) y cumpliendo con este después se transfieren. Es importante que durante este periodo solo se espere a que el óvulo, embrión o zigoto se despegue, durante este momento trabajamos con luz y solo visualizamos la célula para después transferirla al DS. Si la célula se despega antes de un minuto, podemos retirar la pajuela suavemente y solo observar al (óvulo, embrión, zigoto) hasta que transcurra el minuto.

  • Lorena Siavichay: ¿el proceso de vitrificación y desvitrificación en el laboratorio lo realizan a oscuras?

Si es correcto, al inicio solo veo en la placa de cultivo los óvulos que vitrificare, una vez seleccionados se colocan en ES, después de eso apago la luz, hago correr el timer y al minuto ‘10 los vuelvo a ver para valorar su recuperación, si decido llevarlos a los 15 min, entonces vuelvo a apagar la luz y la prendo nuevamente a los 15 minutos y la dejo prendida hasta que termino el paso de VS hasta la pajuela. Con lo que respecta al paso de la desvitrificación, en el medio TS la luz se encuentra todo el tiempo prendida y posterior ha ello ya solo se prende cada que el óvulo pasa de un medio a otro, después de eso se apaga de nuevo.

  • Lorena Siavichay : Si el embrión no se despega de la pajuela inmediatamente en el medio Ts  que movimiento se puede realizar para que se despegue? y porque pasa esto?

Podemos realizar movimientos suaves hacia arriba y abajo a lo largo de la placa de TS, si este movimiento no fuera el suficiente entonces podemos optar por soplar medio por encima de la célula creando una ligera corriente que le ayuda a despegarse e incluso podemos utilizar ambas el movimiento de arriba y abajo y soplar, todo esto siempre sumergidos en el TS. El motivo de que esto suceda es por que al momento de desvitrificar el volumen de la microgota que se deja es muy poco o incluso se pudo haber aspirado medio lo que dejo muy seco y expuesta la célula.

  • Katherine Areiza Sánchez: No sé si has tenido la experiencia de perder un embrión y/o ovulo que estaba vitrificado. ¿Crees que está perdida se da en el proceso de congelación o descongelación?¿Qué podrías recomendarnos para evitar perderlos?

 Cuando iniciaba reproducción (2007) y estaba en mis entrenamientos iniciales, claro que me tocaba perder mas de alguno sin embargo eran soluciones de 4.5 ml en placas de 35mm, con el tiempo el Dr. Masashige Kuwayama ha logrado mejorarse así mismo en todas sus versiones, siendo CRYOTEC la más reciente, e ideando varios conceptos que justo logran que el embriólogo se sienta más cómodo para evitar perder la célula. Por ejemplo, las placas son cóncavas lo que hace que cuando pongas la célula en cualquier parte de la periferia lograras verla al final al centro, las soluciones contienen HPC (hidroxipropilcelulosa) que ayuda a mantener al óvulo en el lugar que usted mismo lo coloca sin que este se mueva demasiado

El proceso de desvitrificación y vitrificación no hace que pierdas las células, claro que las células sufren cambios durante los procesos, pero en ninguno de sus pasos deberías de perderla, si se pierde, te recomiendo lo siguiente. Asegúrese de tener un contraste de luz adecuado, sobre todo hablando en el proceso de VS y TS. Trabaje con el zoom al mínimo cuando vitrifique y desvitrifique de esta manera podrá visualizar mucho mejor en que posiciones se encuentra la célula, y solo cuando necesite valorarla aumente el zoom en su lupa.

  • Eliana Bonilla: Qué recomendación puedes dar ante la mayor fragilidad que vemos con frecuencia ante el ICSI en los óvulos desvitrificados. Cuando rompen fácil y/o degeneran con mayor proporción luego de ser inyectados?

Si la indicación de la paciente y médico es vitrificar óvulos para ciclos posteriores, preservación de la fertilidad o es un ciclo de donante, yo les recomiendo vitrificar a la hora, de tal manera que cuando usted desvitrifique ha esos óvulos podría darles más tiempo de recuperación (tres horas post desvitrificación) y después micro inyectar (el huso meiótico tendrá tiempo suficiente para acomodarse y las membranas tendrán mayor tiempo de recuperación). También es importante entender sean óvulos en fresco y/o desvitrificados, no todas las membranas presentan la misma resistencia y que la calidad del óvulo es diferente, aunque sea la misma cohorte, así que debemos tener cuidado en estos casos para no jalar demasiado citoplasma, o introducir demasiado medio y ser agresivos con el óvulo, es importante valorar nuestro ICSI cada cierto tiempo o cada cierto resultado. También podemos cambiar de agujas ICSI, en el mercado existen algunas que son ultradelgadas que suelen ser mas amables al micro inyectar.

  • Eliana Bonilla: ¿Qué tiempo mínimo deberíamos tener los óvulos en ES si los vemos completamente recuperados, luego de 8 a 9 minutos?

El tiempo lo marca la recuperación del óvulo. Si este esta recuperado al 100% entonces será un tiempo óptimo. Para ser mas objetivos en la recuperación del óvulo o cualquier otra células es importante evaluarla en sus cuatro puntos, procurando que estos puntos están en igual proporción que inicialmente antes de la vitrificación, también ayuda bastante que se realice un contraste de fase, para que usted pueda visualizar mucho mejor esta parte.

  • Erika Mayorga del centro Nacer, en Colombia: ¿Cuándo se prepara la microgota de 50ul para deshidratar los blastos grandes, es solo dejarlos un minuto antes de iniciar la vitrificación?, ese es el único criterio o se debe ver algo como disminución de tamaño al algo así?

Es correcto solo los dejamos un minuto Y esto es antes de INICIAR EL PROTOCOLO CRYOTEC, lo que buscamos es tener una solución hipertónica y deshidratar la célula en el caso de blastocistos con mayor diámetro es decir mayo de 220µm. la solución final deberá ser una microgota de 50 µl con la combinación de DS:WS=2:3. 

Sin embargo, es importante aclarar que, si usted realiza una biopsia en día cinco o seis, posterior a la biopsia se colapsara el blastocisto y una vez que este ha encogido no es necesario que usted lo ponga en la solución de DS:WS, pues ya hemos logrado el objetivo que es deshidratarlo para después vitrificarlo, de tal manera que después de biopsiar usted lo podrá colocar directamente en ES. Buscamos que el blastocisto colapse un poco (se encoja) antes de iniciar con el protocolo normal de CRYOTEC.

  • Paola Manzur Aldana: ¿ Después de estar listos los embriones/óvulos/blastos en el ES, la duración hasta ponerlos en la pajuela es de 1 min ?

El tiempo que marca el protocolo es de (30-60) segundos en el VS1, (10-20) segundos en el VS2y posteriormente en la pajuela, si usted hace todos los pasos tranquilamente como se sugiere le tomara en una mano experta alrededor de 50 segundos y cómodamente en 10 segundos acomodara sus células en la laminilla. De tal manera que cumpliría un minuto lo cual es bastante aceptable.

  • Katherine Areiza Sánchez: ¿ Los 15 min o 12 min el ovulo/embrión debe estar en la primera solución (ES)? ¿Tienen un tiempo específico para el segundo paso?

Los quince minutos están determinados como tiempo máximo en los óvulos y/o blastocistos. Para los embriones esta limitado como tiempo máximo doce minutos durante la solución de ES. Las células pueden permanecer de (8-15min) dentro del ES hasta que estas mismas te indiquen su recuperación, pero más que un tiempo es que usted determine en su laboratorio y estandarice que células son aquellas que recuperan y cuales no, por que de lo contrario cada uno de los embriólogos de su mismo laboratorio tendrá juicios diferentes por lo que el biólogo con mayor experiencia y mejor resultado deberá externar cuando se determina una recuperación exitosa en las células antes de llevarlas al VS. De aquí y justo en este paso es que partimos o no de una buen tasa de supervivencia ya que si no le da un tiempo adecuado a la célula para su recuperación y no da tiempos oportunos para los intercambios de CPA – H2O lo único que obtendrá es un resultado caótico y no por culpa de la vitrificación si no por un mal calculo en su vitrificación. Si usted aun no sabe definir cuando una célula se recupera o no o bien si su criterio aun le falta, le recomiendo esperar los tiempos que el protocolo le sugiere que son 15 min para s

Los óvulos y quince minutos para los blastos, sobre todo, cuando usted no vitrifica de un solo óvulo por pajuela y fueran más es difícil que todos recuperen al mismo tiempo por lo que los inclino mas a que tomen la opción de los 15 min.

  • Lina Restrepo: ¿En el VS se dejaría 1 min máximo, y hay un tiempo mínimo en esta solución?

El tiempo que marca el protocolo es de (30-60) segundos en el VS1, (10-20) segundos en el VS2y posteriormente va a la pajuela. Lo importante aquí es que usted vea que el óvulo, embrión, blastocisto o zigoto no siga flotando en la solución de Vs1, es decir que se mantenga en la parte media lo que nos describe que la célula esta totalmente recubierta del Vs1, también es importante confirmar su tamaño, este deberá estar encogido alrededor del 50% una vez confirmado podemos seguir adelante.

  • Ana Lenis: ¿Podrían colocarse las soluciones en la placa para llevarlas a temperatura ambiente por 1 hora, o habría problemas con la concentración de las soluciones?

Las soluciones (viales) tiene poco volumen por lo que en un par de horas obtendrán la temperatura ideal para desvitrificar o vitrificar, si usted las coloca en las placas hablando de las soluciones de vitrificación usted podría encontrar después el VS un poco como turbio, pero esto es por la acción del HPC que con el aire si tu quieres tomarlo se le forman como hilitos lo que dificulta la visión ya después de unas horas. Pero no veo la necesidad de que expongas el medio a que se pudiera evaporar o hacer ligeramente turbio por que no encuentro la palabra adecuada, tal ves algo chicloso creo seria lo mas correcto.

  • Eliana Bonilla:¿ Igualmente, qué tiempo mínimo debemos dejar en ES los blastocistos, si ya están recuperados ?

Los tiempos siempre estarán marcados por la recuperación de las células. El protocolo le marca que durante el ES (Solución de equilibrio) Puede permanecer (8-15min). El propósito de este paso es introducir agentes crioprotectores (CPAs) en el interior de la célula, cuya finalización exitosa se confirma a través de la recuperación completa del volumen de la célula.

  • Christopher Paul Tello de la Puente: ¿en el caso de los embriones que ya están fuera de la zona pelucida como podemos vitrificarlo ?

Me ha pasado y siempre uso una pipeta bastante grande, trato de controlar el flujo lo mejor posible y sigo el protocolo de (DS:WS) posteriormente inicio la vitrificación, todo lo hago con el menor pipeteo que se pueda dentro del proceso, pero a pesar de mi experiencia han sido pocos mis casos vitrificados así.  También me ha pasado que durante la vitrificación la ZP se sale dejando así al blastocisto en completo hatched, lo único que hago es seguir vitrificando, los dos casos así me han dado embarazos por lo menos los que yo he realizado. Lo que cuidaría es no ser tan agresivo con los pipeteos.

  • Katherine Areiza Sánchez: ¡Saludos a todos! recomiendas mantener los reactivos a temperatura ambiente luego de abrirlos o guardarlos de nuevo en refrigeración?

El volumen del medio es poco, alrededor de 1.0 ml por lo que prácticamente y dependiendo de la cantidad de trabajo podrías usarlo todo en un día. Pero si sobra yo los regreso al refrigerador ya que el tiempo de vida (Shelf life) se alarga mas.

  • Diana López :¿Cuál es el tiempo ideal para transferir los Blastocistos tras la desvitrificacion?, es necesario esperar la reexpansion de Blastocistos Expandidos? o en tu experiencia se pueden transferir contraídos?

 Podemos transferirlos después de tres horas. En mi caso he leído algunos otros artículos que va bien si se recuperan entre tres y cuatro horas, yo me espero tres horas. Desvitrifico, hago el HA, espero tres horas y me va bien teniendo alrededor del 60 % de implantación. Puede pasar que alguno de ellos no este tan expandido y un poco contraído pero no como inicialmente estuvo, lo que indica que va evolucionando. También puede ser que este expendido ya completamente y al momento del transfer se contrae, nosotros ahora lo hemos visto mucho mas claro con la time-lapse, como hace estos movimientos de contraer y expandar.

  • Edibeth Durán Castillo : se puede dividir los medios del kit de warming para dos pacientes?

 Haciendo referencia ha este kit usted lo puede utilizar para el mismo paciente dos veces al mismo momento digamos que tiene (6) óvulos de la paciente SARA y este acomodado en dos pajuelas, puede desvitrificar ambas pajuelas al mismo tiempo. Pero este kit está diseñado para una aplicación.

  • Andrea Doria: Buenas noches, ¿cuánto es el tiempo máximo de recuperación del blastocisto luego de desvitrificarlo?

 Nosotros transferimos 3-4 horas post desvitrificación los blastocistos. Durante este lapso hemos observado una buena recuperación, algunos los transferimos con una recuperación del 80% y otros en su totalidad, teniendo un buen resultado.

  • Jimmy Portella: Antes mencionaban 100% sobrevida, ahora en su página mencionan 99.9%; pero en el abstract de la India comparando cryotec y cryotop bajo. Bajo sus manos en el caso de Cryotec tenía aproximado 97.6% de sobrevida. ¿Puedes explicar las diferencias en los resultados de las tasas?  

El cambio en la página de cryotech es del área de marketing y por lo tanto desconozco la razón del cambio. La tasa puede variar dependiendo de la habilidad del embriólogo, la calidad ovocitaria, el laboratorio, la atura etc.  De ahí la importancia de estar reafirmando la técnica constantemente.

  • Katherine Areiza Sánchez: ¿Cuantas pajuelas se pueden desvitrificar y vitrificar con cada kit?

Les dejo la pagina de cryotec japon donde pueden checar con detenimiento lo que contiene cada uno de los productos. En el caso de las pajuelas podría colocar dos al mismo tiempo y desvitrificar con un solo kit ambas en el caso del Warming kit 102 es decir este kit es solo para un paciente. Una desvitrificación.

Warming Solution. Es para cinco aplicaciones. Cinco desvitrificaciones

  • Edibeth Durán Castillo: ¿podemos utilizar entonces una placa de pozo central para el TS y así se mantendrá el medio a 37 realmente sin riego a que la placa pueda variar la temperatura?

 Nuestra sugerencia es apegarse al protocolo lo mas que se pueda para obtener el mejor resultado posible. La placa de cryotec esta diseñada para que tenga un óptimo resultado, está pensada desde como introduce su pajuela,  que el pocillo esta alejado del piso de la lupa, que los bordes son redondeados para no perder al óvulo y con el volumen apropiado requerido para un óptimo resultado.

  • Edibeth Durán Castillo: ¿cuándo hablas de usarlo dos veces utilizar el medio de desvitrificacion te refieres a 1 a 2 cryotop? si la paciente tiene 4 cryotop con ovocitos y los vamos a desvitrificar todos quiere decir que con esa paciente requeriríamos 2 kit?

Podemos usar el mismo medio warming kit 102, para una misma paciente dos veces, les aconsejo que antes de reusar el medio se valore a conciencia, si usted no ha diluido el medio lo bastante como para considerar no volverle a usar esto pasa mucho cuando se usa pipetas de mayor calibre y no se controlan bien los flujos, diluyendo así los medios y no obteniendo un buen resultado. Y si usted tuviera cuatro pajuelas como lo menciona es correcto tendría que utilizar dos kits.

O bien un solo kit pero desvitrificar dos pajuelas a la ves y posteriormente dos pajuelas mas a la vez. Usando solo dos tiempos el kit, esto realmente lo mencionamos poco debido a que no siempre en una mano experta esto podría dar un excelente resultado pero bajo una mano con poca experiencia podría ser caotico, asi que nuevamente le aconsejamos se apegue lo mas que se pueda al protocolo y como lo señalamos en la pagina por ejemplo el kit 102 (1 pacietes/3 óvulos).

  • Augusta Cordova  : millón gracias por la exposición. Hice ya esta pregunta con anterioridad. ¿Crees tú que el incremento en el porcentaje de fragmentación embrionaria en embriones provenientes de óvulos desvitrificados esté relacionado con alguna falla en el proceso de vitrificación-desvitrificación?

  He visto fragmentación tanto en embriones en fresco como en desvitrificacos, pero yo lo contribuyo mas con la calidad ovocitaria, endometriosis, factor edad y pH. Yo he visto diferencias en cuestión de fragmentación con óvulos de la misma paciente en incubadores diferentes y medios diferentes, asi que creo que va mas por ahí que por la técnica de vitrificación/desvitrificación. En lo único que yo tendría cuidado seria en la realización de HA en blastocistos ya que las ZP si llegan ha afectarse siendo estas mas duras, por tanto le costara mas al blastocisto en salir.

  • Dibeth Durán Castillo  : Según tu experiencia, que tiempo nos recomendarias de incubacion de los embriones desde su desvitri hasta ser transferidos?

 Después de tres horas. Blastocistos y embriones post tres horas se transfieren. Ojalá que puedas transferir todo a día cinco o seis y evitar mas transferir en estadio de embrión. De esta manera podemos ser mas selectivos de lo que tiene mayor probabilidad a implantar y de lo que no.

  • Eliana Bonilla: ¿ Qué explicación y solución tenemos para el caso en el que al descongelar encontramos óvulos con zona pelúcida fracturada?

 Afortunadamente en toda mi experiencia eso no lo he visto, pero me parece bastante interesante lo que te sucede y creo que antes de pensar en la vitrificación como un factor que afecte retrocedería un poco a como estas manipulando el óvulos, muchas veces estos daños pueden generarse cuando se esta eliminando el excedente de granulosa y quizá al cortarla estamos haciendo cercano a l óvulo en este caso a la zona, posteriormente con HYAL (denuding) podemos quizá estar usando pipetas fracturadas o incluso muy justas que también estarían lastimando al óvulo, me parece que yo cuidaría más estas acciones y revisaría con detenimiento mis óvulos antes de iniciar la vitrificación.

  • Eliana Bonilla : Hemos medido la temperatura cerca del estereoscopio al vitrificar y tenemos entre 22 y 23 grados. Nuestros resultados son muy buenos, tendríamos un poco de duda en poner la superficie a 25 grados.

Para hacer una correcta medición usted deberá medir exactamente la superficie donde coloca la placa, ya que muchas veces aun en la cabina tenemos diferentes temperaturas, nosotros tenemos un acrodisco para monitoreo de temperatura, nuestro censor que lo desplazamos por cada una de las cámaras de los incubadores y superficies que necesitamos medir y aparte esta el censor integrado de la campana, siendo así tres temperaturas que deberán marcar por igual. Cuando estamos seguros al final de la temperatura les aconsejo también medir el medio pues me ha pasado que me asegurar por ejemplo estar a 37°C en el caso del TS y una vez que se mide resulta tener unos grados menos. Así que yo me fijare en este detalle para estar super seguras de que trabaja a esa temperatura porque quizá sea mayor o menor. Y si ha usted le va bien con esta temperatura pues estaría mejor aún cerciorarnos y confirmar en que rango trabaja realmente al estar en el medio de ES.  Si usted tiene una excelente sobrevida me parece muy muy bien ahora partamos de lo que es una excelente supervivencia y si es lo que usted busca, porque quizá si maneja un 90% de supervivencia yo la invitaría a realizar pequeños cambios para subir sus tasas de supervivencia, además recordemos que podemos quizá tener una supervivencia buena pero si trabaja con temperaturas fuera de rango por demasiado tiempo usted también puede estar haciendo algún daño irreparable en el huso meiótico y mas que verse afectada la supervivencia podría verse afectados los porcentajes de fecundación.

  • Eliana Bonilla: ¿Qué se podría mejorar, al tener los 25 grados?

Los porcentajes de ingredientes del medio DMSO, HPC, EG, Trealosa, etc… están calculados para el volumen que este kit y este protocolo han testado para obtener las mejores tasas de supervivencia. Factores como la temperatura son determinantes, las bajas temperaturas están asociadas al aumento de la rigidez de la membrana y la rapidez con la que suceden los cambios osmóticos en los procesos de vitrificación y desvitrificación. Por lo que cambios en las temperaturas pueden acelerar la entrada de crioprotector o la salida de agua. De tal manera que cuando este intercambio no se da de una manera adecuada en el caso por ejemplo de la desvitrificación la célula puede estallar.

  •  Katherine Areiza Sánchez: ¿Por qué en algunos casos el cuerpo polar de los óvulos desvitrificados se vuelve transparente e incluso invisible?

No me ha pasado. Si he sabido de casos al respecto, pero para ser honestos solo uno, pero creo este articulo puede ayudarle y dar respuesta. Reproductive BioMedicine Online (2011) 23, 298– 306 / Theoretical and experimental basis of oocyte vitrification. Gary Smith. Al final el CP sera apoptotico y desintegrara quiza la vitrificacion favorece  o induce ha esta etapa.

Le sugiero también que si algún día quiere evaluar a sus junior embryologist en vitrificación deberá observar sus resultados (células) posterior a dos horas de haber desvitrificado y teñir a la célula para valorar que no se ha dañado.